Eur J Endocrinol：石蜡标本RNA组分析在肾上腺皮质癌诊断和预后中的价值

背景：性腺肿瘤(ACC)是一种稀有的内新陈代谢肿瘤(每年每百万人中所有1-2则有)，总体结节病较差。检验对病症管理至关重要，但由于这种疾病的稀有，检验很困难。事实上，在性腺(ACT)中所，ACC是稀有的，大多数是性腺腺瘤(ACA)。病理恶功能性总分统称Weiss总分，最类似于于检验。然而，兼具中所等总分和稀有合组员织学人体内的不非常容易被定义。特别是，断定由大巨噬细胞和寡溶颗粒合组员成的寡溶人体内体的恶功能性是兼具挑战功能性的。

ACC的5年总体死亡率一般低于40%，但异质功能性。结节病分层对个人兴趣治疗决策很重要，特别是在主要用途治疗。临床上运用于的；大要结节病因素是再行Ki-67细胞分裂指数。其他结节病因素多半包括激素新陈代谢和年龄。

那时候的基因序列合组员研究得成结论，基因序列合组员变简化集中于所在各不相同的分子会冠状病毒号。酪氨酸合组员图说是分子会定义的基石。酪氨酸合组员图说将性腺腺瘤与肿瘤划分开来，并鉴定成合组员与结节病密切相关的ACC：“C1a”亚合组员，其细胞分裂基因序列过度表述，结节病不良；“C1B”亚合组员，兼具致病相似性，结节病极佳。从酪氨酸合组员相似性，已推断成特定的mRNA标记，如BUB1BPINK1的差异基因序列表述。这些特异性标记物改善了ACC的检验和结节病分析报告。然而，到目前为止，酪氨酸合组员图说及其特异性替代标记物仅限于提高效率的RNA，需要提高效率的冰冻合组员织比对。在常规实践中所，获取这种各种类型号的材料要求较高，而对于ACC病症来说，往往无法充分利用。

最近的3’RNA基因序列合组员核心技术捕获并基因序列合组员了多磷酸化简化RNA 3’上端的短片段，这些片段不太非常容易被RNA甲醛。与基因序列表述微阵列或标准的全长RNA基因序列合组员各不相同，这种核心技术只需要少量和低质量的RNA，与试管浮动焦油包埋(FFPE)比对兼容。

目地：；大要目地是利用最初3’上端RNA基因序列合组员核心技术，断定试管浮动焦油包埋(FFPE)比对的酪氨酸合组员图说。第二个目地是通过重点研究稀有的寡酸巨噬细胞ACT变体，展示这种核心技术探究大型号FFPE档案的能力。

作法：我们纳入131则有ACT：来自科钦诊所的锻炼数据流和来自维尔茨堡诊所的分立有效性数据流。用QuantSeq(Lexogen)和NextSeq500(Illumina)从FFPE比对中所产生3’酪氨酸合组员。

结果：在锻炼数据流中所，无监督聚类识别成3合组员：“C1A”型号侵袭功能性肿瘤(N=28，29%)、“C1B”型号肿瘤(N=28，29%)和“C2”型号腺瘤(N=39，41%)。FFPE酪氨酸合组员的结节病价值在有效性数据流中所得到证实(5年OS：C1a合组员为26%(N=26)，C1B合组员为100%(N=10)，p=0.003)。在包括再行和Ki-67的多变量模型号中所，FFPE酪氨酸合组员是一个分立的结节病因素(OS-HR 7.5，p=0.01)。寡溶粒巨噬细胞ACT(N=19)未演简化成任何特异簇。寡酸巨噬细胞肿瘤(N=6)和恶功能性充份未明的寡溶巨噬细胞肿瘤(N=4)之外为“C1B”。

图1.锻炼数据流中所ACT的FFPE酪氨酸合组员定义A.基于2000个最易变的基因序列对ACT的非监督定义断定了三个；大要合组员，对应于“C1A”侵袭功能性肿瘤、“C1B”惰功能性肿瘤和“C2”腺瘤。B.运用于生成非监督定义的3个非负乘法水解(NMF)一般来说的热图。荷尔蒙(肾上腺分简化)、细胞分裂和致病病征在每种ACT中所的表述。D.三合组员酪氨酸合组员中所差异最显著的前50个基因序列的表述谱。即通过迭代聚类搜索算法暗示比对密切关系的类似度的一致功能性乘法。行和列是病症比对。认同乘法值的范围从0(从不聚在一起)到1(始终聚在一起)。

图2.各不相同范围内的FFPE酪氨酸合组员定义。对锻炼数据流中所5名病症的两个各不相同范围内进行乌兰材/伊红/两场卡罗皮肤上(放大40倍)，其中所一个为侵袭功能性(-a)区，一个为非侵袭功能性(-b)区。黑条代表50微米。黑色记号暗示有丝分裂。黄色记号暗示不迥然不同号的有丝分裂。B.描述为5名病症采样的两个各不相同的范围内，其中所一个是侵袭功能性(-a)，另一个是侵袭功能性(-b)。不适用：Fuhrman核级不适运用于寡溶巨噬细胞。C.基于PCA的两个；大组分(Dim1、Dim2)的比对投影基于锻炼数据流的95个多样病症中所的2000个最可控基因序列。来自锻炼数据流的比对推断为酪氨酸合组员学年着色的狭隘菱形。来自两个各不相同范围内的8名病症的比对按病症的粉红色推断为全四边形。

图3.ACC有效性数据流中所的FFPE酪氨酸合组员定义和结节病A.比对投影基于PCA的两个；大组分(Dim1，Dim2)，基于锻炼数据流中所95个多样病症中所最可控的2000个基因序列。来自锻炼数据流的比对推断为酪氨酸合组员学年着色的狭隘菱形。来自有效性数据流的比对以酪氨酸合组员一般来说着色的明晰四边形暗示。B.根据有效性数据流中所I-III期ACC病症的数据分析酪氨酸合组员各种类型号进行无病生存。根据有效性数据流的I-IV期ACC病症的数据分析酪氨酸合组员定义，总的死亡率。

结论：3’RNA基因序列合组员法是从FFPE比对中所断定ACT分子会各种类型号的一种简便作法。这项核心技术必要有助于常规运用于和大型号回顾研究。

原文成处：Jouinot A, Lippert J, Sibony M,et al.Transcriptome in paraffin samples for the diagnosis and prognosis of adrenocortical carcinoma.Eur J Endocrinol 2022 Mar 01